便秘是一种常见的肠道疾病,其特征是排便困难、排便不频繁或不完全等。当前,由于年轻人饮食习惯、生活方式的改变以及社会老龄化加剧,其发病率逐渐升高。长期便秘会导致致病菌在结肠中积聚,增加患胃肠道疾病的风险,严重影响患者生活质量。目前临床常用的治疗药物主要为泻剂和促动力剂,短期疗效显著,但长期服用会引发耐药性和腹胀、腹痛等不良反应。碧生源常润茶是一种具有滋阴润燥、润肠通便功效的中药复方保健茶茶剂产品,临床显示较好的治疗效果。近期,研究人员结合“小鼠灌胃模型”,探究碧生源常润茶治疗阴虚便秘的作用机制。

研究中,研究人员首先给予阴虚便秘模型小鼠灌胃碧生源常润茶,通过体质量、脏器指数、排便参数、血清生化指标等,来评价碧生源常润茶对阴虚便秘的改善作用;其次利用基于UPLC-Q/TOF-MS 技术的代谢组学方法,对阴虚便秘小鼠尿液样本进行检测,探究阴虚便秘的发生机制;再然后结合网络药理学方法,分析常润茶治疗阴虚便秘的“多成分-多靶点-多通路”的药效作用机制。研究方法主要有以下两种。

方法一,建立阴虚便秘模型。研究人员将60只雄性ICR随机分成空白对照组(Control)和阴虚便秘模型组(Model)。每组再根据不同的取材时间,分为3d、7d和14d三个亚组。Model 组灌胃0.25mg/kg地塞米松(Dexamethasone,DEX)+9.6mg/kg盐酸洛哌丁胺(Loperamide,LOP),Control组灌胃等量生理盐水,1次/d,连续14d。分别在各时间节点通过检测小鼠体质量、脏器指数(脾脏、胸腺)变化,首次排黑便时间、粪便含水量及小肠推进率变化,血清中环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、促肾上腺皮质激素(ACTH)以及皮质醇(CORT)含量变化对模型进行评估。

方法二,研究阴虚便秘模型尿液代谢组学。研究人员将40只雄性ICR小鼠随机分为正常组(N)、便秘模型组(C)、阴虚模型组(Y)和阴虚便秘模型组(YC),10只/组。C组小鼠采用灌胃LOP法制备便秘模型,Y组小鼠采用灌胃 DEX 法制备阴虚证模型,YC组小鼠采用联合灌胃LOP+DEX 法制备阴虚便秘模型,N 组小鼠灌胃等量生理盐水。运用UPLC-    Q/TOF-MS技术对各组小鼠尿液样本进行代谢组学检测。应用主成分分析(PCA)和正交-偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等多元统计分析方法,结合变量重要性投影(VIP)和T-检验筛选各模型组与正常组小鼠尿液中的差异代谢物。将各模型组与正常组之间的差异代谢物上传至BioVenn平台,绘制Veen图找到阴虚便秘模型特有差异代谢物。利用 MetaboAnalyst 5.0 软件对阴虚便秘潜在生物标志物所涉及的代谢途径进行分析。

小提示:ICR小鼠是Hauschka博士(选育者)用瑞士Swiss小鼠群以多产为目标进行选育,以后美国癌症研究所(Institute of Cancer Research)分送各国饲养实验,各国称之为ICR小鼠。中国科学院遗传研究所在1973年从日本国立肿瘤研究所引进,1979中国医学科学院分院动物中心引进,1978年北京检定所引进,1983年上海计划生育研究所从瑞士苏黎世毒理学研究所引进。

图:碧生源牌常润茶

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